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对于色谱柱,您了解多少?

更新时间:2019-12-26点击次数:706次
对于色谱柱,您了解多少?
   对于色谱柱,您了解多少?
  一、色谱柱的平衡
  色谱柱由工厂测试后是保存在乙腈/水中的。新柱应先使用10-20倍柱体积的甲醇或乙腈冲洗色谱柱。请一定确保您分析样品所使用的流动相和乙腈/水互溶。
  每天用足够的时间以流动相来平衡色谱柱,您就会在处理问题方面获得大的"补偿",而且您的色谱柱的寿命也会变得更长!
  操作步骤:
  a.平衡开始时将流速缓慢地提高,用流动相平衡色谱柱直到获得稳定的基线(缓冲盐或离子对试剂流速如果较低,则需要较长的时间来平衡)
  b.如果使用的流动相中含有缓冲盐,应注意用纯水"过渡"即每天分析开始前必须先用纯水冲洗30分钟以上再用缓冲盐流动相平衡;分析结束后必须先用纯水冲洗30分钟以上除去缓冲盐之后再用甲醇冲洗30分钟保护柱子。
  二、色谱柱的再生
  长期使用的色谱柱,往往柱效会下降(柱子的理论塔板数减低)。可以对色谱柱进行再生,在有条件的实验室应使用一个廉价的泵进行柱子的再生。
  建议用来冲洗柱子的溶剂体积
  色谱柱尺寸 柱体积 所用溶剂的体积
  125-4mm 1.6ml 30ml
  250-4 mm 3.2ml 60ml
  250-10mm 20ml 400ml
  选择再生方法:
  极性固定相(如Si,NH2 ,DIOL基色谱填料)的再生:正庚烷→氯仿→乙酸乙酯→丙酮→乙醇→水
  非极性固定相(如反相色谱填料RP-18,RP-8,CN等)的再生: 水→乙腈→氯仿(或异丙醇)→乙腈→水
  注意:
  a. 在对NH2改性的色谱柱进行再生时,由于NH2可能以铵根离子的形式存在,因此应该在水洗后用0.1M的氨水冲洗,然后再用水冲洗至碱溶液完全流出
  b. 0.05M稀硫酸可以用来清洗已污染的色谱柱,如果简单的用有机溶剂/水的处理不能够完全洗去硅胶表面吸附的杂质,在水洗后加用0.05M稀硫酸冲洗非常有效。
  三、色谱柱的维护
  a.使用预柱保护分析柱(硅胶在极性流动相/离子性流动相中有一定的溶解度)
  b.大多数反相色谱柱的pH稳定范围是2-7.5,尽量不超过该色谱柱的pH范围
  c.避免流动相组成及极性的剧烈变化
  d.流动相使用前必须经脱气和过滤处理
  e.如果使用极性或离子性的缓冲溶液作流动相,应在实验完毕柱子冲洗干净,并保存于甲醇或乙腈中
  f.色谱柱氯化物的溶剂对其有一定的腐蚀性,故使用时要注意,柱及连接管内不能长时间存留此类溶剂,以避免腐蚀。
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